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分光光度法的操作篇一

色谱过程是物质分子在相对运动的两相(固定相和流动相)间分配平衡的过程，可用分配系数k和容量因子k描述。

例题：色谱过程使物质分子在; a.溶液中达到平衡的过程b. 两相中平衡的过程c. 固定相中分配的过程 d. 流动相中溶解的过程

e. 相对运动的两相(流动相与固定相)间分配平衡的过程 答案: e

1.分配系数k=cs/cm，与组分、固定相和流动相性质和温度有关。

2.容量因子k=ws/wm，不仅与组分、固定相和流动相性质和温度有关，还与两相体积有关。容量因子不等是色谱分离的先决条件。

3.色谱过程方程：保留时间与分配系数关系tr=t0(1+k)

第一节 薄层色谱法

分光光度法的操作篇二

掌握薄层色谱法的基本原理、操作方法以及在药物鉴别、检查中的应用。

一、基本原理

1.吸附薄层色谱：吸附剂对不同组分a和b具有不同吸附能力，展开剂也对a和b有不同溶解、解吸能力，当展开剂不断展开， a、b在吸附剂和展开剂之间连续不断吸附解吸，产生差速迁移得到分离。

2.比移值：rf=l/l0，为组分迁移距离与展开剂迁移距离之比

比移值的最佳范围是0.3～0.5，可用范围是0.2～0.8。

影响比移值因素：①被分离物质的结构和性质。极性较强的组分rf较小。②薄层板性质。吸附剂活性越强，吸附作用就越强，rf越小。③展开剂性质。极性越强展开剂rf值增大④展开剂蒸气饱和度对rf也有较大影响。

3.分离度：r=2d/(w1+w2)，两相邻斑点中心距离与两斑点平均宽度的比值

二、操作方法

1.吸附剂和展开剂的选择

(1)吸附剂：常用有硅胶、氧化铝、聚酰胺、硅藻土等。硅胶、氧化铝的活性与含水量有关，含水量高，活性低，吸附力弱;聚酰胺表面的酰胺基可形成氢键，选择性高。

(2)展开剂：极性较强的展开剂适用于极性较强组分的洗脱;极性较弱的展开剂适用于极性较弱组分的洗脱。加入少量酸、碱可以使极性物质斑点集中，减少拖尾，提高分离度。

选择一般原则是，分离极性较强组分时选用活性低的薄层板，以极性强的展开剂展开。分离弱极性组分时，宜选用活性高的薄层板，以极性弱的展开剂展开。调整待测组分rf0.3～0.5范围内。

2.薄层板制备：1份固定相与3份水混和涂布，110℃烘30分钟。

3.点样与展开：点样一般为直径2～4mm圆点，距底2.0cm;展开距离一般为10～15cm。

4.斑点定位：有色可直接观察;有荧光在紫外灯下观察;喷洒显色剂使组分显色。

三、应用 1.鉴别：比较供试品与对照品溶液的比移值 2.杂质检查：杂质对照品比较法;高低浓度对比法